《赌鬼总动员》讲述了老周的孙女周小玉为争夺赌神称号，在爷爷阴间助力下历经波折参赛的故事。
影片中，老周生前是远近闻名的赌神，然而成名后突然离世，未给家人留下任何东西。他的孙女周小玉怀揣着拿回赌神称号的梦想，报名参加了赌神大赛。但现实是残酷的，小玉技术不佳，刚玩几手身上的筹码就被输光，还遭到了赌场老板的嘲讽，这无疑给她泼了一盆冷水。
阴间的老周得知孙女的遭遇后心痛不已，他也想为家人留下点什么。小玉回家后并没有气馁，而是开始刻苦训练，然而姑妈却劝她放弃，认为保住赌神称号并非易事，毕竟赌圣赌后也在商量比赛，小玉显然不是他们的对手，这让她面临着巨大的压力。
晚上，小玉跑到爷爷书房寻找有用的东西，希望能找到提升自己赌技的秘诀，可结果却一无所获。这可急坏了阴间的老周，他在阴间团团转，甚至想打电报给孙女，但由于线路管制无法实现，只能干着急。
此外，影片中还有精彩的情节，午马跟鬼差赌牌，连鬼差都敢糊弄，这一情节为影片增添了不少奇幻和幽默的色彩。整个故事围绕着小玉争夺赌神称号展开，既有她面对困难时的坚持和努力，也有阴间老周对家人的牵挂和无奈，还有午马与鬼差赌牌的奇幻情节，将现实与奇幻元素相结合，为观众呈现出一部别具一格的剧情电影。
